CTLA-4/CD152 抗体・タンパク質・ELISAキット | 治療標的

CTLA-4（CD152 / Cytotoxic T-Lymphocyte Associated Protein 4）は、B7リガンド（CD80/CD86）の結合においてCD28と競合することでT細胞活性化を抑制する共抑制免疫チェックポイント受容体です。FDA承認抗体によって最初に標的とされた免疫チェックポイントとして — Ipilimumab（Yervoy） — CTLA-4は免疫腫瘍学、チェックポイント併用療法、移植寛容研究の中心的存在です。abinScienceは組換えCTLA-4タンパク質、抗CTLA-4抗体、バイオシミラー標準品およびELISAキットを提供しています。

CTLA-4の生物学と作用機序

CTLA-4は活性化T細胞に発現し、制御性T細胞（Treg）では恒常的に発現する~25 kDaのI型膜貫通糖タンパク質です。共刺激受容体CD28とCD80（B7-1）およびCD86（B7-2）のB7リガンドを共有しますが、~10-20倍高い親和性で結合し、CD28を効果的に競合阻害してT細胞活性化を遮断します。

CTLA-4は2つの機構でT細胞応答を抑制します：TCR/CD28下流シグナルを減弱させるためにホスファターゼ（SHP-2、PP2A）を動員する細胞内在性シグナル伝達、および抗原提示細胞からCD80/CD86をトランスエンドサイトーシスにより除去し、他のT細胞が利用可能な共刺激を減少させる細胞外在性機能です。この二重の機構により、CTLA-4遮断はリンパ節における抗腫瘍免疫応答のプライミングに特に効果的です。

主要な研究用途

チェックポイント阻害剤開発 抗CTLA-4治療抗体のスクリーニングおよび特性評価のための組換えCTLA-4タンパク質。結合分析および生物活性比較のためのバイオシミラーIpilimumab標準品。

CTLA-4/B7ブロッキングアッセイ 競合結合アッセイ、レポーター遺伝子アッセイ、IL-2放出またはT細胞増殖を測定する機能的ブロッキング研究のためのCTLA-4-Fcキメラタンパク質およびCD80/CD86タンパク質。

併用療法研究 同一アッセイプラットフォーム上で両標的に対するマッチドタンパク質および抗体を含む、CTLA-4 + PD-1/PD-L1デュアルチェックポイントブロッケード研究用試薬。

PK/ADAおよび免疫原性アッセイ Ipilimumabバイオシミラープログラムを支援するPK ELISAおよび抗薬物抗体（ADA）アッセイ開発のための抗CTLA-4抗体ペアおよびCTLA-4キャリブレータータンパク質。

CTLA-4製品選択ガイド

用途	推奨製品	フォーマット
SPR/BLI結合動態	組換えCTLA-4タンパク質	Avi-taggedまたはbiotinylated
CTLA-4/B7ブロッキングアッセイ	CTLA-4-Fc + CD80/CD86タンパク質	Fc-chimera
サンドイッチELISA / 定量	CTLA-4 ELISAキットまたは抗体ペア	マッチドキャプチャー/検出ペア
フローサイトメトリー / Tregプロファイリング	抗CTLA-4抗体	PE、APCまたはBV421標識
WB / IP検出	抗CTLA-4モノクローナル抗体	非標識
分析的同等性 / 参照	Ipilimumabバイオシミラー	Research-grade RUO

CTLA-4 よくある質問

CTLA-4ブロッケードとPD-1チェックポイントブロッケードの違いは？

CTLA-4ブロッケードは主にリンパ節でのT細胞プライミング段階で作用し、CTLA-4がB7リガンド結合においてCD28を競合阻害するのを防ぎ、T細胞活性化を増強します。PD-1ブロッケードは腫瘍微小環境で作用し、PD-L1/PD-L2によるエフェクターT細胞の疲弊を防ぎます。両メカニズムは相補的であり、これがCTLA-4 + PD-1併用療法（Ipilimumab + Nivolumab）が複数の腫瘍タイプで相乗的な臨床効果を示す理由です。

ブロッキングアッセイにはどのCTLA-4タンパク質フォーマットを使用すべきですか？

ブロッキングアッセイにはCTLA-4-Fcキメラを推奨します。Fcドメインが天然CTLA-4ホモ二量体の結合力を模倣する二価結合を提供するためです。組換えCD80またはCD86タンパク質と組み合わせて、競合結合アッセイまたはレポーター遺伝子ブロッキングアッセイを設定してください。一価の親和性が必要なSPR動態には、His-tagged CTLA-4 ECDを代わりに使用してください。

Ipilimumabバイオシミラーを参照用に提供していますか？

はい。CHO細胞で生産された研究用Ipilimumabバイオシミラー（抗ヒトCTLA-4、IgG1サブクラス）を提供しています。CTLA-4結合アッセイの陽性対照、バイオアッセイ方法開発の標準品、分析的同等性研究に適しています。RUO専用であり、治療目的には使用できません。

フローサイトメトリーでTregの細胞内CTLA-4を検出できますか？

はい。CTLA-4はTregの細胞内コンパートメントで恒常的に発現し、活性化時にのみ一時的に細胞表面に発現します。細胞内染色の場合、まず細胞を固定・透過処理した後、蛍光標識抗CTLA-4抗体で染色してください。活性化T細胞の表面染色の場合、染色前に抗CD3/CD28で24-48時間刺激してください。

CTLA-4/B7レポーター遺伝子ブロッキングアッセイの設定方法は？

典型的なアッセイでは、CTLA-4発現Jurkat-NFAT-Lucレポーター細胞をCD80発現CHO抗原提示細胞と共培養します。CTLA-4結合はNFAT駆動ルシフェラーゼシグナルを抑制し、抗CTLA-4ブロッキング抗体を追加すると抑制が解除され、用量依存的な発光増加が生じます。組換えCTLA-4タンパク質をキャリブレーターとして、Ipilimumabバイオシミラーを陽性対照として使用してください。

参考文献

1. Rowshanravan B, et al. (2018) CTLA-4: a moving target in immunotherapy. Blood. 131(1):58-67. PMID: 29118008

2. Hodi FS, et al. (2010) Improved survival with Ipilimumab in patients with metastatic melanoma. N Engl J Med. 363(8):711-723. PMID: 20525992

3. Wei SC, et al. (2018) Distinct cellular mechanisms underlie anti-CTLA-4 and anti-PD-1 checkpoint blockade. Cell. 170(6):1120-1133. PMID: 28803728