Антитела, белки и наборы ELISA CD279/PD-1 | Терапевтические мишени

PD-1 (Programmed Cell Death Protein 1 / CD279 / PDCD1) — ключевой рецептор иммунного контрольного пункта, экспрессируемый на активированных Т-клетках, В-клетках и NK-клетках. В микроокружении опухоли связывается с PD-L1 (B7-H1) и PD-L2 (B7-DC), индуцируя истощение Т-клеток. Антитела к PD-1 Пембролизумаб (Keytruda) и Ниволумаб (Opdivo) — наиболее успешные препараты иммуноонкологии. abinScience предлагает рекомбинантные белки PD-1, антитела к PD-1, белки PD-L1/PD-L2, стандарты биоаналогов и наборы ELISA.

Биология PD-1 и ось PD-1/PD-L1

PD-1 — трансмембранный белок I типа массой ~50 кДа, индуцируемый на Т-клетках после активации. Внеклеточный IgV-домен связывается с PD-L1 (B7-H1, CD274) и PD-L2 (B7-DC, CD273). PD-L1 широко экспрессируется на опухолевых клетках, антигенпрезентирующих и стромальных клетках, PD-L2 преимущественно на дендритных клетках и макрофагах.

При связывании PD-1 цитоплазматический ITSM фосфорилируется, рекрутируя фосфатазу SHP-2 и ослабляя сигналы ниже TCR и CD28 (PI3K/AKT, RAS/MAPK). В отличие от CTLA-4, PD-1 действует преимущественно на эффекторном этапе в микроокружении опухоли.

Основные области исследований

Разработка ингибиторов контрольных точекРекомбинантные белки PD-1 для скрининга терапевтических антител к PD-1. Белки PD-L1 и PD-L2 для блокирующих анализов. Кинетика связывания SPR/BLI и конкурентный ELISA.

Блокирующие биоанализы PD-1/PD-L1Биоактивные белки PD-L1 и антитела к PD-1 для репортерных генных анализов (Jurkat-NFAT-Luc) и смешанных лимфоцитарных реакций (MLR). Стандартный анализ активности для биоаналогов.

Аналитическая сопоставимость биоаналоговИсследовательские биоаналоги Пембролизумаба и Ниволумаба. Для аналитической эквивалентности, биоанализов активности, профилирования гликанов и исследований принудительной деградации.

Сывороточный PD-1 и анализы PK/ADAНаборы ELISA для циркулирующего растворимого PD-1 (sPD-1). Пары антител к PD-1 для разработки PK и ADA ELISA в клинических программах биоаналогов.

Руководство по выбору продуктов PD-1

Применение	Рекомендуемый продукт	Формат
Кинетика связывания SPR/BLI	Рекомбинантный белок PD-1	Avi-tagged или биотинилированный
Блокирующий ELISA PD-1/PD-L1	PD-1-Fc + белок PD-L1	Fc-химера + His-tagged
Репортерный генный анализ	Биоактивный PD-L1 + антитело к PD-1	Низкий эндотоксин
Проточная цитометрия / профилирование TIL	Антитело к PD-1/CD279	Конъюгаты PE, APC или BV421
Детекция WB / ИГХ	Моноклональное антитело к PD-1	Неконъюгированное
Сывороточный sPD-1	Набор ELISA PD-1	Сэндвич-ELISA
PK/ADA ELISA	Антиидиотипическая пара + калибратор PD-1	Пара захват/детекция
Аналитическая сопоставимость	Биоаналог Пембролизумаба или Ниволумаба	Research-grade RUO

Часто задаваемые вопросы о PD-1

В чём разница между блокадой PD-1 и блокадой PD-L1?

Антитела к PD-1 (Пембролизумаб, Ниволумаб) блокируют взаимодействие как с PD-L1, так и с PD-L2. Антитела к PD-L1 (Атезолизумаб, Дурвалумаб) блокируют только взаимодействие с PD-1, сохраняя PD-L2/PD-1, и могут также блокировать PD-L1/CD80.

Как настроить репортерный генный анализ PD-1/PD-L1?

Ко-культивируйте репортерные клетки Jurkat-NFAT-Luc, экспрессирующие PD-1, с клетками CHO, экспрессирующими PD-L1. Связывание PD-1/PD-L1 подавляет люциферазу NFAT; добавление блокирующего антитела к PD-1 снимает супрессию. Используйте биоаналог Пембролизумаба как положительный контроль.

В чём разница между Пембролизумабом и Ниволумабом?

Пембролизумаб — гуманизированное антитело IgG4κ (C228P), Ниволумаб — полностью человеческое антитело IgG4κ (S228P). Оба блокируют PD-L1 и PD-L2, но связываются с разными эпитопами — Пембролизумаб с петлёй C'D, Ниволумаб с петлёй N.

Что такое растворимый PD-1 (sPD-1)?

Растворимый PD-1 — секретируемая форма, образующаяся при альтернативном сплайсинге, без трансмембранного домена. Сывороточный sPD-1 может связываться с PD-L1 и нарушать взаимодействие PD-1/PD-L1. Повышенные уровни ассоциированы с прогнозом при нескольких видах рака и изучаются как предиктивный биомаркер ответа на терапию анти-PD-1.

Можно ли оценить экспрессию PD-1 методом ИГХ?

Да. Антитела к PD-1 можно использовать на FFPE опухолевой ткани для детекции PD-1 на опухоль-инфильтрирующих лимфоцитах (TIL). ИГХ PD-1 дополняет ИГХ PD-L1 (оценка CPS/TPS) для профилирования иммунного микроокружения.